【Uso previsto】

El kit es una PCR fluorescente en tiempo real con sonda TaqMan para detectar cualitativamente ORF1ab, ácido nucleico de genes N de 2019-nCoV en frotis de garganta, esputo en pacientes con sospecha de síntomas de neumonía y casos de agrupamiento.

Los resultados de las pruebas son solo para referencia clínica y no pueden considerarse como un único punto de referencia para el diagnóstico clínico. Se recomienda realizar análisis manifiestos con respecto a los síntomas clínicos y otros resultados de laboratorio.

Los operadores deben tener experiencia en capacitación profesional en amplificación de genes o pruebas de métodos de biología molecular, y tener calificaciones relevantes para operaciones de laboratorio. El laboratorio debe tener precauciones de seguridad biológica razonables y procedimientos de protección.

【Principio de prueba】

En este kit, los cebadores y las sondas están diseñados para las regiones conservadas y específicas del ORF1ab, N de 2019-nCoV, respectivamente. La PCR fluorescente se usa para detectar el ARN viral después de la purificación del ácido nucleico de la muestra de ARN.

Este kit de prueba utiliza tecnología de PCR fluorescente en tiempo real. Durante la amplificación por PCR, la sonda se une a la plantilla y el grupo informador del extremo 5' de la sonda es dividido por la enzima Taq (actividad exonucleasa 5'→3'), por lo que alejándose del grupo de extinción para generar una señal fluorescente. La curva de amplificación en tiempo real se traza automáticamente en función de la señal de fluorescencia detectada y se calcula el valor Ct de la muestra (la cantidad de ciclos experimentados cuando la señal de fluorescencia en cada tubo de reacción alcanza el umbral establecido). Los fluoróforos FAM, VIC y rojo de Texas se utilizan para marcar el gen ORF1ab, las sondas del gen N en la solución de reacción. Al usar una prueba, la detección cualitativa de los dos genes anteriores de 2019-nCoV se puede realizar simultáneamente.

Para evitar el resultado falso negativo, el kit se proporciona con un control interno (IC), que está marcado con un grupo fluorescente Cy5 que podría usarse para monitorear el procedimiento de extracción y la solución de reacción.

【Componentes principales】

Nota¹: Los diferentes lotes de componentes no se pueden cambiar.

Nota²:El kit de prueba no contiene reactivo de extracción de ácido nucleico, prepare el reactivo antes de usarlo.

1. Manejo de muestras

Agregue 10 μL de control interno a 200 μL de control positivo y control negativo, respectivamente, para realizar la extracción de ácido nucleico.

2. Preparación de reactivos:

Preparación del sistema: tome el liofilizador de amplificación de ácido nucleico preinstalado, luego abra la bolsa de aluminio y centrifugue inmediatamente. La cantidad de muestra de cada prueba debe ser un múltiplo de 8 que contenga un control positivo y un control negativo. Agregue 35 μL de agua libre de nucleasas en cada tubo de reacción.

3. Carga de muestra:

Agregue 5 μL de ácido nucleico de muestra para analizar, control positivo, control negativo de que el volumen total de la reacción es de 40 μL en la solución de reacción asignada. Líquido en la pared del tubo sobre la parte inferior del tubo, así procesa la amplificación por PCR.

Después de la verificación, se estima que la adición de 5 μL-10 μL de aceite de parafina en el sistema de PCR no afectará el resultado de la PCR, pero evitará la contaminación y la vaporización del líquido.